El calendari de manteniment de les ambulàncies s'adhereix generalment als estàndards nacionals de manteniment de vehicles de motor i a les especificacions tècniques del fabricant del vehicle, alhora que incorpora protocols de gestió millorats adequadament i adaptats a les característiques operatives específiques dels vehicles de resposta d'emergència. Normalment, les ambulàncies estan subjectes a un sistema de manteniment integral que combina inspeccions diàries, manteniment programat i comprovacions tècniques especialitzades per garantir que el vehicle es mantingui en un estat de preparació operativa en tot moment.
Les inspeccions bàsiques s'han de dur a terme tant abans com després de cada enviament. Aquestes inspeccions cobreixen l'estat del motor, el sistema de frenada, la pressió dels pneumàtics, la il·luminació d'emergència i els sistemes de sirena, així com l'estat de funcionament dels equips mèdics a bord; qualsevol problema identificat s'ha de resoldre immediatament. El manteniment programat normalment es realitza en funció del quilometratge o dels intervals de temps-per exemple, realitzant un servei bàsic cada distància específica recorreguda (p. ex., de 5.000 a 10.000 quilòmetres) o cada tres mesos. Aquest servei inclou tasques com canviar l'oli del motor i el filtre d'oli i inspeccionar el xassís, així com els sistemes hidràulics i elèctrics.
Pel que fa als equips mèdics instal·lats a l'ambulància-com ara monitors d'ECG, desfibril·ladors i sistemes de subministrament d'oxigen-, s'ha d'establir un programa de manteniment independent. Aquests dispositius s'han de sotmetre a calibracions i proves periòdiques d'acord amb la normativa de gestió d'equips mèdics. A més, després de períodes de funcionament prolongats i d'alta-intensitat o de la realització de missions especialitzades, el vehicle i el seu equip s'han de sotmetre a revisions tècniques especialitzades per garantir que tota la unitat mantingui constantment un alt nivell de fiabilitat i seguretat.
